Percorrer por autor "Combarros-Fuertes, Patricia"
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- Actividad antimicrobiana de mieles españolas acogidas a marcas de calidadPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Tornadijo, María Eugenia; Castro, José M.; Fresno, José María; Estevinho, Leticia M.El 80-90% de los pacientes con cáncer de cuello y cabeza que reciben radio y/o quimioterapia presentan mucositis oral. Es un proceso complejo en el que intervienen el daño oxidativo, la inflamación, la colonización de la mucosa por microorganismos patógenos y el daño directo al ADN. El desarrollo de mucositis supone interrupción de tratamientos, periodos de hospitalización, disfagia y desnutrición y un incremento en los costes sanitarios en tratamientos con mecanismos de acción aislados que no son plenamente satisfactorios. Como la miel presenta simultáneamente propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, antimicrobianas y cicatrizantes puede ser utilizada de forma eficaz en la prevención y el tratamiento de la mucositis oral al actuar sobre diferentes mecanismos fisiopatológicos. El objetivo del estudio fue valorar la capacidad antimicrobiana de mieles de diferentes orígenes florales y valorar las posibles diferencias en dicha capacidad entre mieles similares de diferentes cosechas. Se seleccionaron seis mieles españolas acogidas a marcas de calidad, miel de aguacate y de castaño (DOP Miel de Granada); miel de espliego y de romero (DOP Miel de La Alcarria); miel de silva y de eucalipto (IGP Miel de Galicia), así como dos mieles ecológicas (miel de tomillo y de brezo), recogidas durante dos cosechas consecutivas. En una fase previa se está llevando a cabo un estudio de capacidad antimicrobiana frente a dos bacterias, S. aureus y E. coli. En una siguiente etapa se estudiará la capacidad antimicrobiana sobre microorganismos aislados en la mucosa orofaríngea de pacientes con mucositis oral dándonos una aproximación más exacta del resultado que cabría esperar de la aplicación de miel en estos pacientes. Los resultados del estudio proporcionarán información valiosa sobre las posibles propiedades bioactivas de estas mieles y su aplicación en la prevención y el tratamiento de la mucositis oral secundaria a tratamientos antineoplásicos.
- Actividad antimicrobiana de mieles españolas acogidas a marcas de calidadPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Tornadijo, María Eugenia; Castro, José M.; Fresno, José María; Estevinho, Leticia M.El objetivo del estudio fue valorar la capacidad antimicrobiana frente a diferentes cepas de referencia (Staphylococcus aureus subsp. aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans), de mieles de diferentes orígenes florales y geográficos y valorar las posibles diferencias en dicha capacidad entre mieles similares de diferentes cosechas. Se seleccionaron seis mieles españolas acogidas a marcas de calidad, así como dos mieles ecológicas recogidas durante dos cosechas consecutivas. Los tests antimicrobianos fueron llevados a cabo en microplacas de 96 pocillos utilizando caldo nutritivo o medio BHI para las bacterias y medio YPD para la levadura. El inóculo fue añadido a todas los pocillos y las microplacas fueron incubadas a 37ºC durante 24 horas en el caso de las bacterias y a 25ºC durante 48 horas en el caso de las levaduras. La actividad antimicrobiana fue detectada adicionando 20 Al de una solución de TTC (cloruro de 2,3,5- trifeniltetrazoilo) al 1%. La concentración mínima inhibitoria (CMI) fue definida como la concentración de miel más baja capaz de inhibir el crecimiento microbiano. Según los resultados observados podemos concluir que las mieles estudiadas presentan principalmente actividad antibacteriana a unas CMI en torno al 20%.
- Antibacterial action mechanisms of honey: physiological effects of avocado, chestnut, and polyfloral honey upon Staphylococcus aureus and Escherichia coliPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Estevinho, Leticia M.; Teixeira-Santos, Rita; Rodrigues, Acácio G.; Pina-Vaz, Cidália; Fresno, José María; Tornadijo, María EugeniaNumerous studies have explored the antibacterial properties of di erent types of honey from all around the world. However, the data available describing how honey acts against bacteria are few. The aim of this study was to apply a flow cytometry (FC) protocol to examine and characterize the primary e ects of three varieties of honey (avocado, chestnut and polyfloral) upon physiological status of Staphylococcus aureus and Escherichia coli cells to reveal their antibacterial action mechanisms. The e ects of honey samples on membrane potential, membrane integrity, and metabolic activity were assessed using di erent fluorochromes, in a 180 min time course assay. Time-kill experiments were also carried out under similar conditions. Exposure of S. aureus and E. coli to the distinct honey samples resulted in physiological changes related to membrane polarization and membrane integrity. Moreover, honey induced a remarkable metabolic disruption as primary physiological e ect upon S. aureus. The di erent honey samples induced quite similar e ects on both bacteria. However, the depth of bacteria response throughout the treatment varied depending on the concentration tested and among honey varieties, probably due to compositional di erences in the honey.
- Antimicrobial activity of quality brands Spanish honeysPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Tornadijo, María Eugenia; Castro, José M.; Estevinho, Leticia M.; Fresno, José María80-90% of patients with head and neck cancer who receives radiation and/or chemotherapy have oral mucositis. Oral mucositis is a complex process involving oxidative damage of oral mucosal, inflammation, mucosal colonization by pathogenic microorganisms and direct damage to DNA. The development of oral mucositis led to the interruption of the treatments, periods of hospitalization, dysphagia with malnutrition in patients and increased healthcare costs in treatments which have isolated mechanisms of action and are not fully satisfactory. As honey has antioxidant, anti-inflammatory, antimicrobial and healing properties, it can be used effectively in the prevention and treatment of oral mucositis by acting simultaneously on different pathophysiological mechanisms. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of honeys from different floral sources and to evaluate the possible differences that may happen in such capacity between similar honeys of different years of production. We selected six types of Spanish honey from quality brands avocado honey (Persea sp.) and chestnut honey (Castanea sp.) from DOP Miel de Granada; lavender honey (Lavandula sp.) and rosemary honey (Rosmarinus officinalis) from DOP Miel de La Alcarria; blackberry honey (Rubus sp.) and eucalyptus honey (Eucalyptus sp) from PGI Miel de Galicia and two organic honey, thyme honey (Thymus sp.) and heather honey (Erica sp.), collected during two consecutive harvests (2010 and 2011). We studied antimicrobial activity against microorganisms isolated from oropharyngeal mucosa of patients who suffer oral mucositis, Gram-positive (Staphylococcus aureus and Streptococcus pyogenes) and Gram-negative bacteria (Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli) and yeasts (Candida albicans and Candida glabrata). These assays gave us accurate information about what would be expected from the application of honey in those patients. Antimicrobial test were carried out according to Silva et al. (2012) using Nutrient Broth or Brain Heart Infusion to bacterias or Yeasts Peptone Dextrose to yeasts on microplates (96 wells). Honey was diluted in water and transferred into the first well. Serial dilutions were performed. 20 μl of a solution of 1% TTC was used for detect antimicrobial activity Candida albicans and Candida glabrata showed higher resistance and their growth was not inhibited at the honey concentrations used. Further studies using higher concentrations of honey are required. Among bacteria all the tested honeys were able to inhibit their growth but showed different antimicrobial activity depending on the microorganism tested. Minimum inhibitory concentration ranged from 3.9 to 250 mg/ml. Generally gram-negative bacteria were less resistant, something that can be explained by the variability that exists in the resistance in bacterial strains within a specie. Differences were also observed in the antimicrobial activity of similar honeys from different years of production. Being a natural product, honey’s composition is in a constant state of change, depending on factors such as climatology which affect plant species available.
- Bacteriostatic and bactericidal activity of diferente Spanish honeyPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Estevinho, Leticia M.; Tornadijo, María Eugenia; Castro, José M.; Fresno, José María; Vaz, Cidália PinaThe aim of this study is to determine the antimicrobial capacity of Spanish honey from diferente floral and geographical origins in order lo select one which shows higher antimicrobial activity to be used in the prevention and trealment of oral mucositis derived from treatments of radio and/or chemotherapy.
- Bioactive components and antioxidant and antibacterial activities of different varieties of honey: a screening prior to clinical applicationPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Estevinho, Leticia M.; Dias, L.G.; Castro, José M.; Tomás-Barberán, Francisco A.; Tornadijo, María Eugenia; Fresno, José MaríaThis study assessed 16 different honey samples in order to select the best one for therapeutic purposes. First, a study of honey's main bioactive compounds was carried out. Then phenolic profiles were determined and specific compounds quantified using a HPLC system coupled to a mass spectrometer. Then, antioxidant activity, by three in vitro methods, and antibacterial activity against reference strains and clinical isolates were evaluated. Great variability among samples was observed regarding ascorbic acid (between 0.34 ± 0.00 and 75.8 ± 0.41 mg/100 g honey; p < 0.001), total phenolic compounds (between 23.1 ± 0.83 and 158 ± 5.37 mg/100 g honey; p < 0.001), and total flavonoid contents (between 1.65 ± 0.11 and 5.93 ± 0.21 mg/100 g honey; p < 0.001). Forty-nine different phenolic compounds were detected, but only 46 of them were quantified by HPLC. The concentration of phenolic compounds and the phenolic profiles varied widely among samples (between 1.06 ± 0.04 and 18.6 ± 0.73 mg/100 g honey; p < 0.001). Antioxidant activity also varied significantly among the samples. All honey varieties exhibited antibacterial activity against both reference and clinical strains (effective concentrations ranged between 0.05 and 0.40 g/mL depending on the honey sample and bacteria tested). Overall, samples with better combinations of bioactive properties were avocado and chestnut honeys.
- Estudio microbiológico de mieles españolas acogidas a marcas de calidadPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Castro, José M.; Tornadijo, María Eugenia; Estevinho, Leticia M.; Fresno, José MaríaActualmente la legislación europea no incluye especificaciones sobre higiene o conta-minación microbiana de la miel y la mayoría de los estudios microbiológicos se centran en la detección de Clostridium botulinum. Teniendo en cuenta que existen numerosas fuentes de con-taminación de la miel, desde los granos de polen, pasando por el intestino de las abejas, hasta los manipuladores, resulta importante evaluar su calidad higiénica y seguridad microbiológica.Se seleccionaron seis tipos de miel de diferentes orígenes florales y geográficos acogidas a marcas de calidad y dos muestras de miel ecológica durante dos cosechas consecutivas 2010 y 2011. En total fueron analizadas 15 muestras de miel. 10 g de cada una de las muestras fueron pesados asépticamente y homogeneizados en 90 mL de agua peptonada estéril (dilución 10-1) en un homogeneizado haciendo diluciones seriadas con el mismo diluente. Se realizaron recuentos de microorganismos aerobios mesófilos en PCA (30ºC, 48 h); mohos y levaduras siguiendo el proto-colo de ISO 21527-2:2008; Staphylococcus aureus en Baird-Parker agar con yema de huevo, telurito y una solución de sulfadimidina (37ºC, 24 h); esporas de clostridios sulfito reductores para lo cual se tomaron alícuotas de 10, 5, 1 y 0,1 mL de la suspension inicial, se trataron térmicamente en tubos de ensayo a 80ºC durante 5 minutos y se cubrieron con agar SPS (37ºC,5 días); coliformes totales y Escherichia coli mediante el uso de la técnica del número más probable según el método oficial de la AOAC 2005.03 y detección de Salmonella sp. según el método Oficial AOAC 989.13. Las determinaciones fueron realizadas por triplicadoOcho de las muestras estudiadas no llegaron al límite de detección para microrganismos aerobios mesófilos y para aquellas en las que se observó crecimiento microbiano, los recuentos fueron bajos, oscilarando entre 13,35± 5,8 y 339,4 ± 67,0. En el caso de mohos y levaduras ninguna de las muestras llegó al límite de detección. Los bajos recuentos observados son indicativos de un adecuado manejo apícola y unas buenas prácticas de extracción y procesado de la miel. En ningu-na de las muestras se llegó al límite de detección para Staphylococcus aureus y fueron negativas para clostridios sulfito reductores y Salmonella spp. Los recuentos estimados para coliformes totales oscilaron entre 33,3 ± 23,1 y 140 ± 20 ufc /g sin llegar a encontrar E.coli en ninguna de ellas con lo que los coliformes detectados en las muestras de miel se pueden asociar a especies cuyo origen en la miel es ambiental.En base a los resultados obtenidos podemos concluir que todas las muestras estudiadas fueron manipuladas bajo óptimas condiciones higiénicas y resultan microbiológicamente seguras para el consumidor.
- Estudio palinológico de mieles españolas acogidas a marcas de calidadPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Valencia-Barrera, Rosa María; Estevinho, Leticia M.; Fresno, José MaríaMuchas de las propiedades bioactivas que presenta la miel han sido relacionadas con su origen botánico por lo que su conocimiento es muy importante. Aunque se están desarrollando métodos más sencillos y rápidos, el análisis palinológico continúa siendo esencial para determinar el origen floral de la miel lo que, por otro lado, permite atribuirle un mayor valor al producto.Se determinó el origen floral de seis tipos de miel acogidas a marcas de calidad y dos muestras de miel ecológica, durante dos cosechas consecutivas 2010 y 2011 analizando un total de 15 muestras. El método utilizado para la preparación de las muestras fue el recomendado por la Comisión Internacional de Botánica Apícola (ICBB) [1]. Se realizó un análisis cualitativo exami-nando cada una de las preparaciones al microscopio óptico a 400 y 1000 aumentos. Se identifica-ron por término medio 650 granos de polen en cada muestra de miel utilizando diversas claves y bibliografía [2,3] así como la palinoteca del Departamento de Biodiversidad y Gestión Ambiental de la Universidad de León.Se identificaron 92 tipos polínicos pertenecientes a 36 familias botánicas. En torno al 73% del polen identificado perteneció a plantas nectaríferas mientras que el 27% restante procedió de plantas poliníferas o productoras de polen y mielatos. En todas las muestras estudiadas se encontró el tipo polínico Cytisus scoparius. Otros tipos polínicos que se presentaron con fre-cuencia fueron Rubus ulmifolius (encontrado en el 93% de las muestras), Castanea sativa (87%), Echium vulgare y Crataegus monogyna (80%) y Prunus spinosa (73%). El número de tipos polínicos presentes en cada muestra varió entre 13 y 47, siendo esta variabilidad el resultado de la vege-tación existente en las diferentes zonas geográficas y de la preferencia de las abejas por algunas especies botánicas. Aunque todas las mieles fueron comercializadas como uniflorales, solo ocho de las quince muestras de miel estudiadas fueron catalogadas como tal, el resto no alcanzó los contenidos mínimos en polen como para ser incluidas dentro de este grupo y fueron clasificadas como mieles multiflorales. Actualmente solo las legislaciones específicas para marcas de calidad contemplan un apartado relativo a los contenidos mínimos en polen necesarios para conseguir la unifloralidad.
- Evaluation of honey cell-induced effects on bacteriaPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Estevinho, Leticia M.; Castro, José M.; Tornadijo, María Eugenia; Vaz, Cidália PinaAlthough there exist numerous studies to establish antimicrobial activity of different types of honey, few studies describe the mechanism of their antimicrobial action. Flow cytometry is an analytical method which allows to characterize cell populations at single cell level.
- Evaluation of physiological effects induced by manuka honey upon staphylococcus aureus and escherichia coliPublication . Combarros-Fuertes, Patricia; Estevinho, Leticia M.; Teixeira-Santos, Rita; Rodrigues, Acácio G.; Pina-Vaz, Cidália; Fresno, José María; Tornadijo, María EugeniaSeveral studies have explored the antimicrobial properties of manuka honey (MkH). However, the data available regarding antibacterial action mechanisms are scarcer. The aim of this study was to scrutinize and characterize primary e ects of manuka honey (MkH) upon the physiological status of Staphylococcus aureus and Escherichia coli (as Gram-positive and Gram-negative bacteria models, respectively), using flow cytometry (FC) to reveal its antibacterial action mechanisms. E ects of MkH on membrane potential, membrane integrity and metabolic activity were assessed using di erent fluorochromes in a 180 min time course assay. Time-kill experiments were carried out under the same conditions. Additionally, MkH e ect on e ux pumps was also studied in an E. coli strain with an over-expression of several e ux pumps. Exposure of bacteria to MkH resulted in physiological changes related to membrane potential and membrane integrity; these e ects displayed slight di erences among bacteria. MkH induced a remarkable metabolic disruption as primary physiological effect upon S. aureus and was able to block effux pump activity in a dose-dependent fashion in the E. coli strain.