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Authors
Advisor(s)
Abstract(s)
Research on chestnut blight, caused by the fungus Cryphonectria parasitica, aims to
understand and mitigate its virulence on Castanea sativa Mill, the main host. The use
of Cryphonectria hypovirus 1 (CHV-1), known for inducing hypovirulence in the fungus, is
one of the main resources of the disease biological control. Conversion of the wild C.
parasitica by hypovirulent strains containing the virus leads to reduced fungal pathogenicity.
Oxaloacetate acetylhydrolase is one of the enzymes involved in the mechanism of
pathogenicity of C. parasitica, and its expression is known to be influenced by CHV-
1 infection.
In this study, virulent isolates of C. parasitica were intentionally converted to hypovirulent
strains. RNA extraction was performed using two separate methods, with the purpose that the
cDNA obtained was used to assess Oxaloacetate acetylhydrolase expression in isogenic
converted isolates.
In the following step, we screened specific Oxaloacetate acetylhydrolase primers and two
other primers to select reference genes for the execution of RT-qPCR experiments.
Unfortunately, time constraints hindered the achievement of the expected final results.
In addition, a growth analysis of the isolates was performed to decipher significant differences
between virulent and isogenic converted isolates.
A investigação sobre o cancro do castanheiro, causado pelo fungo Cryphonectria parasitica, visa compreender e mitigar a sua virulência em Castanea sativa Mill., o principal hospedeiro. A utilização do hipovírus Cryphonectria 1 (CHV-1), conhecido por induzir hipovirulência no fungo, é um dos principais recursos de controlo biológico da doença. A conversão de isolados selvagens de C. parasitica por isolados hipovirulentos contendo o vírus resulta na redução da patogenicidade do fungo. A oxaloacetato acetil-hidrolase (OAH) é uma das enzimas envolvidas no mecanismo de patogenicidade de C. parasitica, e a sua expressão é influenciada pela infeção por CHV-1. Neste estudo, isolados virulentos de C. parasitica foram convertidos intencionalmente em cepas hipovirulentas. A extração de RNA foi realizada utilizando dois métodos distintos, com o objetivo de que o cDNA obtido fosse utilizado para avaliar a expressão da OAH em isolados isogénicos convertidos. Numa etapa seguinte, selecionámos primers específicos para OAH e outros dois primers para genes de referência com vista à realização de experiências de RT-qPCR. Infelizmente, as limitações de tempo impediram a obtenção dos resultados finais esperados.
A investigação sobre o cancro do castanheiro, causado pelo fungo Cryphonectria parasitica, visa compreender e mitigar a sua virulência em Castanea sativa Mill., o principal hospedeiro. A utilização do hipovírus Cryphonectria 1 (CHV-1), conhecido por induzir hipovirulência no fungo, é um dos principais recursos de controlo biológico da doença. A conversão de isolados selvagens de C. parasitica por isolados hipovirulentos contendo o vírus resulta na redução da patogenicidade do fungo. A oxaloacetato acetil-hidrolase (OAH) é uma das enzimas envolvidas no mecanismo de patogenicidade de C. parasitica, e a sua expressão é influenciada pela infeção por CHV-1. Neste estudo, isolados virulentos de C. parasitica foram convertidos intencionalmente em cepas hipovirulentas. A extração de RNA foi realizada utilizando dois métodos distintos, com o objetivo de que o cDNA obtido fosse utilizado para avaliar a expressão da OAH em isolados isogénicos convertidos. Numa etapa seguinte, selecionámos primers específicos para OAH e outros dois primers para genes de referência com vista à realização de experiências de RT-qPCR. Infelizmente, as limitações de tempo impediram a obtenção dos resultados finais esperados.
Description
Mestrado de dupla diplomação com a Université Libre de Tunis
Keywords
Chestnut blight Hypovirulence Biological control