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Authors
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Abstract(s)
Olive oil consumption increased worldwide and recognized beneficial health effects are largely related to the presence of minor phenolic compounds that promote the oxidative stability in olive oil, influence its organoleptic properties and contribute to the claim on the protection of blood lipids from oxidative stress, particularly hydroxytyrosol and its derivatives (e.g. oleuropein complex and tyrosol). However, there is no international regulation for their specific analysis, with a myriad of methods and conditions published over the years, most of them requiring increasingly sophisticated equipment. Many procedures have emerged over the years to simplify their determination, including the pre-hydrolysis of the bound forms of hydroxytyrosol and tyrosol derivatives followed by simpler quantification by high performance liquid chromatography. Thus, the present work aimed to internally optimize and validate a simple, high-throughput and reliable analytical method for the estimation of these compounds, with a particular focus on the hydrolysis conditions. For this purpose, an all- in-one acid hydrolysis/extraction method and subsequent analysis by chromatography was selected from the literature. The effectiveness of hydrolysis over time was tested with standard and samples, indicating that there is an effective need for a hydrolysis time of 6 h for completeness, neither with signs of significant degradation of the released phenolic alcohols nor of the internal standard. The chromatographic conditions were also optimized under isocratic elution, allowing for 6 min runs. For method validation, linearity was verified (0.1 - 19.0 μg mL-1 and r2 = 0.9999 for both hydroxytyrosol and tyrosol) and low limits of detection and quantification were obtained for hydroxytyrosol (6.5/21.8 ng or 8.2/27.3 mg/kg of olive oil) and tyrosol (4.6/15.2 ng or 5.7/19.0 mg/kg of olive oil). Precision was assessed and all results showed a relative standard deviation below 1%. The method also showed excellent accuracy with recoveries above 99%. The method was applied to 103 olive oil samples from centenarian olive trees from the Côa Valley region, with variable total contents of hydroxytyrosol and tyrosol derivatives between 7.6 and 36.3 mg/20 g of olive oil, with results above the limit established for the use of the health claim, which demonstrates that the studied oils are of great interest.
O consumo de azeite aumentou a nível mundial e os reconhecidos efeitos benéficos para a saúde estão largamente relacionados com a presença de compostos fenólicos minoritários que promovem a estabilidade oxidativa do azeite, influenciam as suas propriedades organoléticas e contribuem para a alegação de proteção dos lípidos do sangue contra o stress oxidativo, nomeadamente o hidroxitirosol e seus derivados (por exemplo, complexo oleuropeína e tirosol). No entanto, não há regulamentação internacional para suas análises específicas, com uma infinidade de métodos e condições publicados ao longo dos anos, a maioria deles exigindo equipamentos cada vez mais sofisticados. Muitos procedimentos surgiram ao longo dos anos para simplificar sua determinação, incluindo a pré-hidrólise das formas ligadas de hidroxitirosol e derivados de tirosol seguida de quantificação mais simples por cromatografia líquida de alta eficiência. Assim, o presente trabalho teve como objetivo otimizar e validar internamente um método analítico simples, de alto rendimento e confiável para a estimativa desses compostos, com foco particular nas condições de hidrólise. Para tanto, foi selecionado da literatura um método integrado de hidrólise/extração ácida e posterior análise por cromatografia. A eficácia da hidrólise ao longo do tempo foi testada com padrões e amostras, indicando que há necessidade efetiva de um tempo de hidrólise de 6 h para completude, sem sinais de degradação significativa dos álcoois fenólicos liberados ou do padrão interno. As condições cromatográficas também foram otimizadas sob eluição isocrática, permitindo corridas de 6 min. Para validação do método, foi verificada linearidade (0,1 - 19,0 μg mL-1 e r2 = 0,9999 para hidroxitirosol e tirosol) e baixos limites de deteção e quantificação foram obtidos para hidroxitirosol (6,5/21,8 ng ou 8,2/27,3 mg/kg de azeite) e tirosol (4,6/ 15,2 ng ou 5,7/19,0 mg/kg de azeite). A precisão foi avaliada e todos os resultados mostraram um desvio padrão relativo abaixo de 1%. O método também apresentou excelente exatidão com recuperações acima de 99%. O método foi aplicado a 103 amostras de azeite de oliveiras centenárias da região do Vale do Côa, com teores totais variáveis de hidroxitirosol e derivados de tirosol entre 7,6 e 36,3 mg/20 g de azeite, com resultados acima do limite estabelecido para a utilização da alegação de saúde, o que demonstra que os azeites estudados são de grande interesse.
O consumo de azeite aumentou a nível mundial e os reconhecidos efeitos benéficos para a saúde estão largamente relacionados com a presença de compostos fenólicos minoritários que promovem a estabilidade oxidativa do azeite, influenciam as suas propriedades organoléticas e contribuem para a alegação de proteção dos lípidos do sangue contra o stress oxidativo, nomeadamente o hidroxitirosol e seus derivados (por exemplo, complexo oleuropeína e tirosol). No entanto, não há regulamentação internacional para suas análises específicas, com uma infinidade de métodos e condições publicados ao longo dos anos, a maioria deles exigindo equipamentos cada vez mais sofisticados. Muitos procedimentos surgiram ao longo dos anos para simplificar sua determinação, incluindo a pré-hidrólise das formas ligadas de hidroxitirosol e derivados de tirosol seguida de quantificação mais simples por cromatografia líquida de alta eficiência. Assim, o presente trabalho teve como objetivo otimizar e validar internamente um método analítico simples, de alto rendimento e confiável para a estimativa desses compostos, com foco particular nas condições de hidrólise. Para tanto, foi selecionado da literatura um método integrado de hidrólise/extração ácida e posterior análise por cromatografia. A eficácia da hidrólise ao longo do tempo foi testada com padrões e amostras, indicando que há necessidade efetiva de um tempo de hidrólise de 6 h para completude, sem sinais de degradação significativa dos álcoois fenólicos liberados ou do padrão interno. As condições cromatográficas também foram otimizadas sob eluição isocrática, permitindo corridas de 6 min. Para validação do método, foi verificada linearidade (0,1 - 19,0 μg mL-1 e r2 = 0,9999 para hidroxitirosol e tirosol) e baixos limites de deteção e quantificação foram obtidos para hidroxitirosol (6,5/21,8 ng ou 8,2/27,3 mg/kg de azeite) e tirosol (4,6/ 15,2 ng ou 5,7/19,0 mg/kg de azeite). A precisão foi avaliada e todos os resultados mostraram um desvio padrão relativo abaixo de 1%. O método também apresentou excelente exatidão com recuperações acima de 99%. O método foi aplicado a 103 amostras de azeite de oliveiras centenárias da região do Vale do Côa, com teores totais variáveis de hidroxitirosol e derivados de tirosol entre 7,6 e 36,3 mg/20 g de azeite, com resultados acima do limite estabelecido para a utilização da alegação de saúde, o que demonstra que os azeites estudados são de grande interesse.
Description
Keywords
Phenolic compounds Hydroxytyrosol Tyrosol Olive oil Health claim Hydrolysis