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- Interacção entre isolamentos portugueses não homólogos de Albugo candida e de Brassica oleraceaPublication . Jorge, Lurdes; Dias, João SilvaAvaliou-se o nível cotiledonar o potencia l de infecção de cinco isolamentos portugueses de A. candida (quatro colhidos em Brassica rapa - Ac50G, Ac508, Ae509 e Ac5 1 O, e um em Raphanus sativus - Ac513) em 40 amostras de B. oleracea de diferentes proveniências geográficas. Algumas amostras mostraram-se susceptíveis aos isolamentos não homólogos de B. rapa, nomeadamente a Couve repolho (Large Blood Red) e a Couve lombarda "Brusselse Winter". Estas amostras apresentaram níveis médios de infecção iguais ou superiores a 20,0 e a 46,7%, respectivamente, independentemente do isolamento de B. rapa testado.
- Network performance of multi-service circuit switched networks simulational comparison of variants of DAR and RTNRPublication . Jorge, Lurdes; Craveirinha, José; Gomes, TeresaThe use of dynamic routing methods has an important impact on the performance of multi-service networks namely in overload and failure conditions. The paper describes and compares the performance of variants of reference dynamic routing methods (DAR and RTNR). Two variants of DAR resulting from the extension to multi-service networks of the original formulation of the method are presented. Also a simplification of the trunk reservation mechanism per traffic class of RTNR is considered. The major results of extensive experimentation with these variants of the routing methods using a discrete event simulation platform are discussed. The simulation model includes Poisson and Engset type multi-class traffic flows. Conclusions concerning the relative performance of the methods at network level and per traffic class are put forward.
- Influência da adubação potássica na produtividade e qualidade do tomate para consumo em fresco (Lycopersicon esculentum Mill.) cultivado ao ar livrePublication . Vieira, Ana; Jorge, LurdesO objectivo deste ensaio foi avaliar a influência do nível de adubação potássica na produtividade e qualidade do tomate produzido ao ar livre para consumo em fresco. Testaram-se três níveis de adubação potássica (600;700 e 900Kg K2O/ha) usando três variedades indeterminadas de tomate: ''Boa F1'', ''Coração de Boi'' e ''Nacho F1''. Embora durante os dois meses de período de colheita não se tenham registado diferenças significativas de produtividade entre cultivares, tendo as produções oscilado entre os 46,0 e os 47,6Kg/m2,as cultivares híbridas ''BoaF1'' e ''NachoF1'' obtiveram valores de produção comercializável superiores em 146,7% e 140,0%, respectivamente, relativamente à variedade ''Coração de Boi'',que revelou ser muito susceptível ao rachamento e a outras doenças fisiológicas, apresentando grande percentagem de frutos deformados, independentemente da modalidade de adubação testada. A aplicação de níveis de K2O superiores a 600Kg/ha originou aumentos de produtividade total e comercializável, e diminuiu a incidência de frutos com carência de cálcio, em todas as cultivares.
- Isolation and sequence analysis of alfa-tubulin gene from Phytophora cinnamomiPublication . Dias, Teresa; Andrade, Maria; Jorge, Lurdes; Vaz, Madalena; Martins, Fátima; Dominguez, Ángel; Choupina, AltinoPhytophthora diseases cause widespread economic and environmental losses worldwide. Thousands of plant species are susceptible. In Portugal, Phytophthora cinnamomi is responsible for chestnut ink disease. Despite the differences there are a number of key steps common to most infection strategies, including adhesion to the plant surface, plant penetration through the secretion of a diverse range of cell wall-degrading enzymes and hyphal growth. The cell cytoskeleton plays a critical role in these processes. Microtubules are a major constituent of the cell cytoskeleton. They participate in a wide range of cellular functions, such as motility, division, maintenance of cell shape, and intracellular transport. However, microtubule role is variable depending on the organism, cell type and other factors. Tubulin is the major constituent of microtubules and is composed of a heterodimer of two closely related proteins, alpha and beta tubulin. In S. cerevisiae cells, the essential TUB1 gene is the major gene, while the nonessential gene TUB3 is a minor gene, encoding α-tubulin. The β-tubulin subunit is encoded by the TUB2 gene. In Magnaporthe grisea both α-and β-tubulins are found as single-copy genes. The Oomycetes are, however, phylogenetically quite distinct from the fungi. Analysis of structural, biochemical and molecular characteristics have led to the Oomycetes being grouped with the chromophyte algae. In order to elucidated the role of cytoskeleton in pathogenicity mechanisms of Phytophthora cinnamomi, was cloned a gene encoding alpha-tubulin from P. cinnamomi. To isolated this gene, the existing Tub1 nucleotide sequences were retrieved from the NCBI GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank). These sequences were aligned in Clustal and degenerate primers Tub1 and Tub2 were designed. A 1200bp fragment was generated from genomic DNA by PCR and subsequently cloned into pGEM-T vector. To complete the open reading frame it was used the HE-TAIL PCR. The complete ORF was sequenced and submitted in EMBL databases (Accession number AM412177.1). Based on the computational analysis through BioEdit software, TUB1 has a 1362 bp ORF and encodes a 453 a.a protein with a molecular weight of 49,911kDa. Phylogenetic analysis of deduced amino acid sequence using FASTA programs from EMBL databases revealed that Tub1 revealed 99.6% identity with alpha-tubulin of P. infestans T30.4 and 98.9% identity with P. capsici, but only 68,1 % with alpha-tubulin of S. cerevisiae. Key Words: Phytophthora cinnamomi; Ink disease; Alpha-tubulin; microtubules Acknowledgements: The Project COMBATINTA/SP2.P11/02 Interreg IIIA – Cross-Border Cooperation Spain-Portugal, financed by The European Regional Development Fund, and the Project “Identification, characterization and role of molecular factors associated with the mechanisms of infection of Fagaceae species by Phytophthora cinnamomi” (PTDC/AGR-AAM/67628/2006) FCT, supported this work.
- Meios de luta contra a ferrugem branca das crucíferas [Albugo candida (Pers.) Kuntze]: um contributoPublication . Jorge, Lurdes; Dias, João SilvaEstudos realizados no ISA, usando 40 cultivares de Brassica oleracea e oito isolamentos portugueses de A. candida, de origem geográfica diversa, e provenientes de diferentes hospedeiros (três dos isolamentos colhidos em B. oleracea, quatro em B. rapa e um em Raphanus sativus) levaram à selecção de cultivares de B. oleracea com elevados níveis de resistência cotiledonar a A. candida de origem homóloga, confirmando uma perspectiva de luta genética para o seu controlo. A concomitante constatação de ocorrência de infecções cruzadas entre isolamentos de A. candida e hospedeiros não homólogos, vem confirmar os inconvenientes da proximidade espacial entre diferentes culturas do género Brassica, e da utilização de rotações não adequadas. O facto de A. candida, em situações desfavoráveis para o seu desenvolvimento, sobreviver sob a f01ma de oósporos no solo, aponta para o recurso a meios de luta que limitem a quantidade de inóculo existente no solo.
- Trichoderma harzianum Lip1 genePublication . Jorge, Lurdes; Choupina, Altino; Monte, EnriqueAn extraordinary panoply of cell-wall degrading enzymes has been related to the mycoparasitism process of Trichoderma sp. However, the role of lipolytic enzymes in this process is less known. The aim of this study is to characterize the first extracellular triacylglicerol lipase described in T. harzianum . The nucleotide sequence of Lip1 gene from T. harzianum CECT 2413 (T34) can be accessed in EMBL database (AM180877.1), including the 5’ upstream and the 3’ downstream regions. Lip1 open reading frame (ORF) has 1667 bp, encoding a predicted protein of 532 amino acids (Lip1), that can be accessed in UniProtKB (B0B099_TRIHA).
- Trichoderma harzianum lipolytic enzymes – a contributionPublication . Jorge, Lurdes; Monte, Enrique; Choupina, AltinoTrichoderma has been related to the mycoparasitism process due to an extraordinary range of cell-wall degrading enzymes (CWDE): chitinases, β-1,3 and β-1,6 glucanases, celulases and proteases. However, the role of lipases and carboxylesterases in this process is less known, although lipids were up to 3% of fungal CW (Feofilova, 2010). According to Silva et al. (2009) and Lopes et al. (2012), in experiments involving T. reesei and Pythium ultimum, it seems that lipases are implicated in mycoparasitism and are secreted in a phytopathogen-dependent manner, as they, like most of the CWDE already described, are inducible by substrate. One of the purposes of this work was to find if the lipolytic enzymes of T. harzianum were alike homologous enzymes of other Trichoderma species. Here we present our contribution to the knowledge of T. harzianum T34 lipolytic enzymes (EC 3.1.1).
- Metodologias de identificação e elucidação de genes em bibliotecas genómicasPublication . Jorge, LurdesNo âmbito da unidade curricular de Biologia Molecular esta lição enquadra-se no último capítulo, sobre a Tecnologia do DNA recombinante. Pretende-se integrar conceitos previamente abordados noutras aulas teóricas, com os desta lição, recorrendo à exposição de um caso concreto: a construção e rastreio de bibliotecas de DNA.
- Virulência, enzimas lenhinolíticas e perfil metabólico de cryphonectria parasitica em estirpes virulentas e hipovirulentas convertidas por CHV1 hipovirusPublication . Abdellaziz, Omar; Jorge, Lurdes; Moura, Luísa; Coelho, Valentim; Gouveia, Maria EugéniaCryphonectria parasitica, fungo responsável pelo cancro do castanheiro, causa lesões necróticas (cancros corticais) no tronco e ramos das árvores hospedeiras. O hipovírus, Cryphonectria hypovirus 1 (CHV1) reduz a virulência (hipovirulência) e altera a morfologia do fungo em cultura (redução da pigmentação e esporulação). As estirpes hipovirulentas CHV1 são utilizadas com sucesso na Europa como agentes de controlo biológico do Cancro do castanheiro. Objetivos: O objetivo deste trabalho foi compreender o efeito do hipovírus na virulência e metabolismo do fungo, comparando a produção de algumas enzimas lenhinolíticas e os perfis metabólicos de estirpes virulentas e estirpes isogénicas de C. parasitica convertidas (com CHV1). Métodos: A virulência de cada isolado foi avaliada por inoculação de micélio do fungo em maçãs (cv. Golden Delicious) e em ramos destacados de castanheiro com um ano de crescimento. Para a deteção da atividade de enzimas lenhinolíticas (lacases, peroxidases e celulases) foram usados vários substratos e compostos indicadores. O perfil metabólico de C. parasitica foi avaliado pelo sistema Biolog FF microplates pela utilização de 95 fontes diferentes de carbono. Resultados: A utilização de MicroPlacas FF (Biolog, Inc.) indicaram que a utilização de 95 fontes de carbono pelos cinco isolados de C. parasitica, foram significativamente diferentes (p <0,001), quando os substratos foram agrupados em seis tipos de compostos químicos. Os maiores valores de AWCD foram obtidos para os hidratos de carbono, ácidos carboxílicos e polímeros, e os menores valores para os grupos aminas / amidas, aminoácidos e compostos diversos. Conclusões: A avaliação da virulência de isolados de C. parasitica é importante para o estudo dos processos de hipovirulência mediados pelo hipovírus CHV1. Os ramos destacados de castanheiro foram, em nosso estudo, mais adequados que o teste em maçã para diferenciar as estirpes hipovirulentas das virulentas de C. parasitica. Os isolados virulentos evidenciaram sempre uma maior atividade de lacase induzida por ácido tânico (Lac3) e de outras enzimas lenhinolíticas (LiP, MnP e celulase) quando comparadas com os hipovirulentos. Os resultados da análise dos perfis metabólicos mostram que alguns grupos de substratos foram mais consumidos por isolados hipovirulentos. Estes estudos abrem novas perspetivas para entender o processo biológico usado pelo hipovírus, e sugerem que este é um método para discriminar estirpes hipovirulentas, e estudar a ecologia e a aptidão em campo destes isolados do fungo.
- Isolation and analysis of lip2 gene from Trichoderma harzianumPublication . Vaz, Madalena; Belo, Hélio; Jorge, Lurdes; Gonzalez, Francisco J.; Monte, Enrique; Choupina, AltinoTrichodorma spp. covers a group of fungi extremely common in soils of all climatic areas. These fungi arc efficient enzyme producers, with industrial applications, or in nature, involved in the degradation of the coli wall of the phytopathogens as well as in the degradation of other fungi, organic matter and nutrients secreted by roots.