Biblioteca Digital do Instituto Politécnico de Bragança   Instituto Politécnico de Bragança

Biblioteca Digital do IPB >
Escola Superior Agrária >
Teses de Mestrado >
BIO - Biotecnologia >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10198/5817

Título: Caracterização do gene gip de Phytophthora cinnamomi Rands associado à doença da Tinta do castanheiro e pesquisa de novos fitofármacos no controlo da doença
Autor: Martins, Maria de Fátima Tomé
Orientador: Choupina, Altino
Sousa, Maria João
Palavras-chave: Castanheiro
Phytophthora cinnamomi Rands
GIP
RT-qPCR
SDS-PAGE
Plasmídios
Issue Date: 2010
Editora: Instituto Politécnico de Bragança, Escola Superior Agrária
Citação: Martins, Maria de Fátima Tomé (2010) - Caracterização do gene gip de Phytophthora cinnamomi Rands associado à doença da tinta do castanheiro e pesquisa de novos fitofármacos no controlo da doença. Bragança: ESA. Dissertação de Mestrado em Biotecnologia
Resumo: Uma característica notável da interacção entre plantas e microrganismos patogénios de espécies de Phytophthora é a produção de proteínas inibidoras de glucanases (GIP) relacionadas com a doença da Tinta do castanheiro. Dada a grande importância do castanheiro (Castanea sativa Mill) ao nível da economia e ecologia na região do Nordeste Transmontano, tornou-se necessário melhorar o conhecimento sobre os mecanismos de infecção de Phytophthora cinnamomi Rands, através do estudo da proteína GIP como mecanismo de resposta a proteínas hidrolíticas, endo-β-1,3-glucanases por parte da planta. Este estudo, teve como objectivo clonar o gene gip e avaliar a expressão por gel de SDS-PAGE em diferentes tempos de indução e determinar em qual dos substratos naturais utilizados existe maior expressão por RT-qPCR. Paralelamente foram efectuados biotestes com plantas Castanea sativa Mill e com Phytophthora cinnamomi de modo a estudar a capacidade antimicrobiana de óleos essenciais extraídos de Mentha pulegium L. Os resultados deste estudo revelaram que a clonagem foi bem sucedida após a visualização em gel de agarose 0.8 % (v/v) de uma banda de 5369pb e outra de 940pb corresponde ao vector pET-28a(+) e á ORF do gene gip. A expressão da proteína verificou-se às 8 horas de indução pela presença de uma banda 31kDa observada por gel SDS-PAGE. A análise da expressão por RT-qPCR indicou que a expressão do gene gip é maior quando o patogénio cresce na presença de serrim 0.2 % (p/v) como substrato indutor. Os ensaios com óleos essenciais extraídos de Mentha pulegium L revelaram que a P. cinnamomi é inibida a uma concentração de 80 % (v/v), na qual a planta se mantem viavel e a sua sobrevivencia não é afectada. Desta forma o uso deste produto natural como agente activo é de grande importância, especialmente nas regiões que têm soutos como recursos naturais, de grande valor económico, podendo vir a ser uma alternativa ao controlo de P. cinnamomi.A remarkable characteristic of the interaction between plants and pathogen microorganisms of Phytophthora species is the production of inhibitory proteins of glucanases (GIP) related with the chestnut ink disease. Due to the great importance of the chestnut (Castanea sativa Mill) at economical and ecological levels in the Nordeste Transmontano region, became necessary to improve the knowledge about the infection mechanisms of Phytophthora cinnamomi Rands, through the study of GIP proteins, as a response mechanism to hydrolytic proteins, endo-β-1,3-glucanases, by the plant. In the present study was intended to clone the gene gip and to evaluate the expression by SDS-PAGE gel in different induction times and to determine in which natural substrates used there is a higher expression for RT-qPCR. At the same time were carried out bioassays with Castanea sativa Mill plants and Phytophthora cinnamomi in order to study the antimicrobial activity of the essential oils extracted from Mentha pulegium L. The results obtained revealed that the cloning was well succeeded after the visualization in a agarose 0.8 % (v/v) gel of two bands of 5369pb and 940pb corresponding respectively to the vector pET-28a(+) and to the ORF of the gip gene. The protein expression was observed at 8 hours of induction by the presence of a band of 31kDa in a SDS-PAGE gel. The analysis of expression by RT-qPCR shown that the expression of the gip gene is higher when the pathogen grows in the presence of 0.2 % sawdust (w/v) as a inductor substract. The essential oils extracted from Mentha pulegium L. revealed that P. cinnamomi is inhibited in a concentration of 80 % (v/v), in which the plant remains viable and its survival is not afected. By this way the use of this natural product as an active agent if of great importance, specially in the regions that have chestnut orchards as natural resources, with high economical value, and may ultimately be an alternative way in the control of P. cinnamomi.
URI: http://hdl.handle.net/10198/5817
Appears in Collections:BIO - Biotecnologia

Files in This Item:

File Description SizeFormat
Tese Fatima ULTIMA VERSAO 2010PDF.pdf1,32 MBAdobe PDFView/Open

Statistics
FacebookTwitterDeliciousLinkedInDiggGoogle BookmarksMySpaceOrkut
Formato BibTex mendeley Endnote Logotipo do DeGóis 

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.

 


  © Instituto Politécnico de Bragança - Biblioteca Digital - Feedback - Statistics
  Estamos no RCAAP Governo Português separator Ministério da Educação e Ciência   Fundação para a Ciência e a Tecnologia

Financiado por:

POS_C UE