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Título: Desenvolvimento e validação de uma metodologia para a determinação da composição em ácidos gordos da membrana de eritrócitos por cro-matografia gasosa com detetor de ionização em chama
Autor: Costa, Helena da Conceição Fernandes da
Orientador: Amaral, J.S.
Lima, R.
Palavras-chave: Eritrócitos
Ácidos gordos
Cromatografia gasosa
Validação de metodologia
Data de Defesa: 2014
Resumo: Atualmente, é consensual a ideia de que a composição lipídica da dieta influencia de forma determinante o risco de algumas doenças crónicas. A ingestão de grandes quanti-dades de ácidos gordos saturados e ácidos gordos trans tem sido associado com dislipi-démias, exacerbar de processos inflamatórios e aumento do risco de doenças cardiovas-culares, pelo contrário o consumo de ácidos gordos polinsaturados, em especial os óme-ga-3, tem sido associado a diversos benefícios para a saúde. Pelo facto de os glóbulos vermelhos apresentarem um tempo de vida útil elevado, cerca de 120 dias, tem sido sugerido que o perfil em ácidos gordos das membranas destas células poderá ser usado não apenas como um biomarcador que reflita a ingestão de macronutrientes da dieta, mas também como um biomarcador associado a diferentes padrões metabólicos e pato-logias tais como diabetes, cancro e doenças cardiovasculares. Por este motivo, e devido a um interesse crescente na definição de possíveis relações entre perfis de ácidos gordos e o risco de doenças crónicas, várias têm sido as metodo-logias propostas para a extração, separação, identificação e quantificação de diversos lípidos, em particular de ácidos gordos em matrizes tão diversas como alimentos e teci-dos biológicos. Assim, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver um método simples e rápido para a identificação e quantificação de ácidos gordos presentes na membrana de eritróci-tos utilizando cromatografia gasosa com detector de ionização em chama (GC-FID). Para tal, foram testados diferentes protocolos, um dos quais incluiu um passo de extra-ção de lípidos com base na adaptação de um método clássico (método de Folch) e outros protocolos, em que se testaram diferentes parâmetros tais como realização de saponificação, diferentes tempos de metilação e realização da extração e derivatização num único passo. Depois de selecionado e otimizado o método procedeu-se ao estudo dos parâmetros de validação, tais como a gama de linearidade e curvas de calibração, precisão e exatidão, limite de deteção e limite de quantificação.
Currently, it is general accepted idea that the lipid composition of the diet strongly in-fluences the risk of some chronic diseases. The ingestion of large amounts of saturated fatty acids and trans fatty acids have been associated with dyslipidemia, exacerbated inflammatory processes and increased risk of cardiovascular diseases. In contrast, the consumption of polyunsaturated fatty acids, especially Omega-3 fatty acids, has been associated with several health benefits. Due to the fact that red blood cells have a high lifetime, about 120 days, it has been suggested that the fatty acid profile of these cells membranes can be used not only as a biomarker that reflects dietary macronutrient in-take, but also as a biomarker associated with different metabolic patterns and patholo-gies such as diabetes, cancer and cardiovascular diseases. For this reason, and due to a growing interest in the definition of possible relationships between profiles of fatty acids and the risk of chronic diseases, several methodologies have been proposed during the last years for the extraction, separation, identification and quantification of various lipids, in particular of fatty acids in diverse matrices such as foods and biological tissues. Thus, the main objective of the present work consisted in developing a simple and rapid method for the identification and quantification of fatty acids existing in the erythrocyte membrane, by using gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID). To accomplish this goal, different protocols were tested, one of which included a step of lipid extraction based on the adaptation of a classic method (Folch method) and other protocols, which included the evaluation of different parameters such as including a saponification reaction, different times of methylation and using a one-step protocol (for lipid extraction and derivatization reaction). After selected and optimized, the method was validated based on the study of the gene-rally used parameters for this purpose, such as range of linearity and calibration curves, precision and accuracy, limit of detection and limit of quantification.
URI: http://hdl.handle.net/10198/11761
Designação: Mestrado em Tecnologia Biomédica
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