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Abstract(s)
As reacções alérgicas causadas pela ingestão de alimentos constituem um problema emergente na gestão da segurança alimentar. De
modo a salvaguardar a saúde dos consumidores, os ingredientes que possam causar reacções alérgicas devem ser devidamente rotulados
e a contaminação cruzada deve ser evitada. Entre as diversas reacções provocadas pelos alimentos que contêm produtos de casca rija
(chocolate, bolachas e bolos), as provocadas pelos alimentos que contêm avelã são consideradas das mais perigosas devido à sua
frequência e gravidade [!]. Recentemente, a detecção de resíduos de alergénios recorrendo a técnicas baseadas no DNA, em particular,
na reacção em cadeia da polimerase (PCR) têm-se mostrado alternativas promissoras aos métodos imunológicos correntes. Contudo,
matrizes complexas corno o chocolate, contêm polissacarídeos e polifenóis que inibem a PCR. Actualmente existem diversos kits
comerciais que permitem a extracção de DNA, mas apenas um número Limitado permite a obtenção de DNA em quantidade e pureza
adequadas para PCR. Pretendeu-se com este trabalho comparar diversos métodos de extracção de DNA (CTAB, Wizard, Nucleospin e
Wizard Magnetic) com e sem a adição de polivinilpirrolidona (PVP) e/ou RNAse. Para tal, prepararam-se misturas de referência
contendo quantidades conhecidas de avelã em chocolate (0.01-10%) e procedeu-se à extracção. O rendimento e pureza dos extractos
foram avaliados por espectrofotornetria. Para a detecção de avelã foram usados primers específicos para o gene hspl para a obtenção de
fragmentos de 100 bp [2]. Os resultados mostraram que os métodos Wizard com RNAse e CTAB, ambos com a adição de PVP 1%,
permitiram níveis de amplificação semelhantes até extractos com 0,05% de avelã, com rendimentos mais elevados com o método Wizard
(-100 ng/μL). Os métodos Nucleospin Food kit com RNAse e Wizard Magnetic apresentaram rendimentos semelhantes ao método
Wizard, tendo também permitido a detecção de 0,05% de avelã, no entanto evidenciaram pouca reprodutibilidade na amplificação.
Description
Keywords
Citation
Melo, Vítor S.; Santos, Cristina G.; Costa, Joana; Mafra, Isabel; Amaral, J.S.; Estevinho, Leticia M.; Oliveira, M.B.P.P. (2011). Comparação de métodos de extração de DNA para a detecção de resíduos de avelã em chocolate como potencial alergéneo. In XXII Encontro Nacional da Sociedade Portuguesa de Química. Braga